THP-1人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞對乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用，無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白?？梢杂梅鸩ù?TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。

細(xì)胞特性

1） 來源：急性單核細(xì)胞白血病，單核細(xì)胞

2） 形態(tài)：單核細(xì)胞，懸浮

3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶（15ml離心管）或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）復(fù)蘇的存活細(xì)胞15mL離心管常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1） 收到細(xì)胞后請勿拆除封口膜，75%酒精消毒擦拭瓶壁將15mL離心管置于37℃培養(yǎng)箱放置約1-2h，若發(fā)現(xiàn)離心管破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請?jiān)诩?xì)胞移入2個新的T25培養(yǎng)瓶后，在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛移入培養(yǎng)瓶的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

THP-1人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇(細(xì)胞培養(yǎng)級 推薦：iCell-8211)；雙抗，1%。

2） 參考傳代比例：傳代時控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細(xì)胞生長至8-10 ×105cell / mL時進(jìn)行傳代。

3） 參考換液頻率：傳代時換液

4） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

5） 凍存液：完quan培養(yǎng)液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我?guī)斓慕?jīng)驗(yàn)復(fù)蘇存活率約50%，復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長）

6） 【注意事項(xiàng)】：

該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)以及客戶的反饋，傳代時使用【半換液法】對細(xì)胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。

1. 您在收到我們提供的用15mL離心管（充液為完quan培養(yǎng)基）發(fā)貨的細(xì)胞后，請不要通過離心的方式收集細(xì)胞，可以先準(zhǔn)備兩個新的T25培養(yǎng)瓶，然后將細(xì)胞混合均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加培養(yǎng)基到10ml。放入到37℃培養(yǎng)箱中。

2. thp-1懸浮細(xì)胞。該細(xì)胞在培養(yǎng)時更喜歡溫和處理，培養(yǎng)時盡量少對細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對細(xì)胞的傷害。換液時不要全培養(yǎng)基更換，建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代，添加細(xì)胞培養(yǎng)基以稀釋細(xì)胞至維持密度即可。

3.  細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口大品pai優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。FBS不要滅活，如果細(xì)胞生長緩慢請嘗試使用其他FBS或暫時將FBS濃度增加到20%

4.  該細(xì)胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇（細(xì)胞培養(yǎng)級別），若不添加，可能會對細(xì)胞狀態(tài)造成影響。

β-巰基乙醇的穩(wěn)定性有限，不可將β-巰基乙醇添加到完quan培養(yǎng)基中長期儲存，在每次傳代或液體添加時再添加β-巰基乙醇。

β-巰基乙醇（2-qiu基乙醇）被添加到淋巴細(xì)胞或其他細(xì)胞培養(yǎng)物中，因?yàn)樵谂囵B(yǎng)基中使用的FBS中氨基酸半胱an酸供不應(yīng)求，而胱an酸則很多。有些細(xì)胞（例如T細(xì)胞）無法將半胱an酸轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中，必須將其轉(zhuǎn)化為半胱an酸。β-巰基乙醇將胱an酸還原為可被細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的形式，然后轉(zhuǎn)化為細(xì)胞生長所需的半胱an酸。  β-巰基乙醇還是一種還原劑，可以分解培養(yǎng)中細(xì)胞產(chǎn)生的許多有毒代謝產(chǎn)物，從而改善細(xì)胞周圍的環(huán)境。

5.  該細(xì)胞對細(xì)胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時請注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍（具體請參考細(xì)胞說明書）。

6 . 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時請酌情提高細(xì)胞量。

7 .通常情況下可以通過向正在生長的細(xì)胞中添加完quan培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長，每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中，來完成細(xì)胞的全換液。

ATCC有關(guān)thp-1細(xì)胞保持細(xì)胞活力的說明

（頻繁的細(xì)胞計數(shù)是監(jiān)測thp-1的最佳方法。這些細(xì)胞應(yīng)該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養(yǎng)基（使它們具有條件培養(yǎng)基）來培養(yǎng)。您不需要每次都離心細(xì)胞并重新傳代。當(dāng)在我們的實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)時，到第2天，細(xì)胞通?？梢詳U(kuò)增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×10 5個活細(xì)胞/ ml時需要進(jìn)行傳代。不允許細(xì)胞密度超過1×10（6）活細(xì)胞/ ml。）

二． 細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞換液: 通常情況下可以通過向正在生長的細(xì)胞中添加完quan培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長，每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中，來完成細(xì)胞的全換液。

3） 細(xì)胞傳代：傳代時控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細(xì)胞生長至8-10 ×105cell / mL時進(jìn)行傳代。

4） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。    

1，細(xì)胞凍存時，取上清，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入凍存液，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，細(xì)胞密度2x106/支，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。