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人神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y/STR鑒定介紹
SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細胞的飽和密度大于1X106細胞/cm2。
人神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y/STR鑒定特性
(1)來源:腦神經(jīng)母細胞瘤,轉(zhuǎn)移部位骨髓
(2)形態(tài):上皮細胞樣,半貼壁生長
(3)含量:>1x106個/mL
(4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
(5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:
?。?)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;
?。?)存活細胞,收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
?。?)收到細胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。
SH-SY5Y人神經(jīng)母細胞瘤細胞/STR鑒定/鏡像綺點(iCell)用途:僅供科研使用。
細胞接收后的處理:
(1)收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
(2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
(3)T25瓶中的培養(yǎng)基取出離心后,去上清,添加6ml新的*培養(yǎng)基,重新加入原T25培養(yǎng)瓶。
(4)如果細胞長滿90%請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用本公司附帶的*培養(yǎng)基。
(5)接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
(1)準備MEM/F-12(1:1)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。
(2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
(3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細胞處理:
(1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至6ml。
(2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1、將上清取出,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,和上清一起在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4、將細胞懸液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注:次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
(3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。
下面T25瓶為類;
1、細胞凍存時,取出上清,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2、4min1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度1-2xE6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
3、將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
鏡像綺點(上海)細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務介紹:
一、原代細胞服務:
各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
原代細胞相關(guān)技術(shù)服務及整體實驗外包服務
二、細胞系服務:
細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書
細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導
細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等
三、iPS細胞服務:
iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)(有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層)
iPS細胞增殖及冷凍保存
iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習
新藥及實驗儀器上市前評估
四、其他技術(shù)外包服務、客戶定制服務等